Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的流程中逐渐扩展

从第一次出现人微内自身免疫到出现1改进型心血管疾病医学患者的成效率在婴幼儿时期就有比较好的说明了，多个人微内自身免疫非典改进型的婴幼儿里有70%在血清切换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的婴幼儿这一比例增大到84%。相较之下，占医学1改进型心血管疾病一半以上的改进型1改进型心血管疾病的病症机制还未得到更大幅度的研究者。

越来越多的人开始理应用于分期子系统来判别1改进型心血管疾病的成效：个微在出现多种人微内自身免疫时进入第1阶段性，出现皮质醇亦非度时进入第2阶段性，出现患者时进入第3阶段性。一些多发人微内自身免疫非典改进型的个微，在1期和2期，成效较慢，并发展为病症的1改进型心血管疾病。我们之前说明了了一两组在首次样品到多种人微内自身免疫结果显示后至再加10年无心血管疾病的亦非慢成效者，这两组病症数目再加，但基本特征非常明确。随后，我们推断出人微内自身抗体特异性CD8+T蛋白反理应在成效亦非快的病症里基本不存在，但在近来病症和长期存在的心血管疾病病症里很容易样品到。这有可能断定，与成效病症相较，这些病症自身免疫反理应的调节增强。

现代研究者断定，尽管调节性T蛋白(Treg)为数出现异常，但心血管疾病病症存在一些功能缺点，其里最主要对IL-2的反理应能力也减少。此外，心血管疾病病症里的不稳定性CD4+T蛋白有可能对调节更具抵抗性，表现为不稳定性T蛋白的可抑制消退，自然显现出的Treg和微外显现出的诱导Treg，以及抗体随之而来的CD4+T蛋白里IL-2反理应消退。本研究者的用意是说明了了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一个大亦非亦非快成效者里的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以老年人为基础的纵向研究者，在21岁表列胃癌的病症亲属里核对1改进型心血管疾病的危险因素。我们之前说明了了长期亦非快成效者的基本特征，他们保持良好多重人微内自身免疫非典改进型多达10年，但未出现心血管疾病的医学患者，慢性或非来受虐自身免疫。随后，10名继续保持良好无心血管疾病并愿意获取大量血液结果显示的亦非快成效者纳入T和B蛋白功能比对。在目前的研究者里，8名慢成效者(SP两组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人微内自身免疫非典改进型。所有的参加者都始终保持良好1改进型心血管疾病成效的1期，尽管一些人随后失去了人微内自身免疫对某些抗体的非典改进型反理应，然而，一名病症已经始终保持良好2期至再加6年，但未出现医学患者，一名病症被诊断为心血管疾病，该受测者72岁，在采集飞行测试里结果显示时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据比对里对该小分次子来进行了基本上评估。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白练成和T蛋白可抑制飞行测试评估小分次子里Treg的kHz、表改进型和功能。理应用于FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)来进行无都由聚类比对，评估Treg表改进型。

结果：与保健小分次子相较，来自慢成效微的无意识CD4+T蛋白的都由聚类揭示，激活的无意识CD4+ TregkHz增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来增大有关。一名HbA1c下降的病症与成效亦非快者和也就是说的对照两组相较，Treg明人有所不尽相同。功能比对断定，与保健小分次子相较，来自亦非快成效微的Treg介导的CD4+不稳定性T蛋白可抑制明显受损。表现为对不稳定性CD4+T蛋白CD25和CD134表达出来的可抑制增大。

由此可知1 深入的表改进型比对揭示，CD4+Treg亚改进型在慢成效队列里增大。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有小分次子的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标识物表达出来深入研究出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)理应用于9个不尽相同Treg标识聚合的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在节点两组一处成品。每个节点里的饼由此可知声称单个标识的表达出来级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以揭示整微标识表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合由此可知，以及FlowSOM识别子系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于丰度为每个metacluster箱次子中央线由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。深橙色边框值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推表示法秩深入研究。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 理应用于CITRUS的预测模改进型证实，TregkHz的增大是成效亦非快的由此可知案。评定依赖改进型(a - f)和柑橘比对(g-k)相比较SP参加者和也就是说的HD参加者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的值得一提的是性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来来进行分离，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(布氏)两组以及小分次子SP 606(深橙色)里CD25+ cd127的kHz概述由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖改进型次子集的箱次子中央线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来低压着色，箭头突出的簇被识别子系统为SP和HD队列之间的不尽相同。(j)箱次子中央线由此可知揭示了在SP(布氏)和HD(灰点)两组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于丰度(比例)。(k)直方由此可知揭示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标识相对于表达出来与或多或再加表达出来(橙色);上列，内核Treg_3;下面即刻，内核Treg_4。或多或再加与所有其他簇里标识的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推表示法秩深入研究

由此可知3 与保健献血者相较，成效亦非快者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表达出来标识的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热由此可知(sp606不最主要在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(黑色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)的FlowSOM GITR表达出来串联，揭示直方由此可知(c)和概述由此可知(d)。Wilcoxon以此类推表示法秩和深入研究，p< 0.07(深橙色)所有小分次子最主要，p< 0.05(橙色)小分次子SP 606和也就是说的HD不最主要在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表达出来，从评定依赖改进型，从所有HD(黑色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)串联，揭示直方由此可知(e)和概述由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推表示法秩深入研究

由此可知4 来自亦非快成效的CD4+ treg蛋白控制不稳定性CD4+T蛋白的能力也减少。SP两组用橙色的中央线和边框声称，HD两组用黑色的中央线和边框声称，深橙色的中央线/边框声称小分次子sp606。理应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标识为CFSE, Treg按观察的比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生蛋白，培育3天后来进行流式蛋白练成样品。(a-d)与CD4+此番者相对于理应的treg培育(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。理应用于非典改进型对照(激活的号召蛋白不含treg)计算可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

由此可知5 不稳定性CD4+T蛋白对亦非快成效的T蛋白再生的可抑制更敏感。SP两组用橙色的中央线和边框声称，HD两组用黑色的中央线和边框声称，深橙色的中央线/边框声称小分次子sp606。理应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标识，treg按观察的比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生蛋白，培育3天后来进行流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因次子比对。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

结论：我们得出的结论是，来自亦非快成效次子的再生无意识CD4+Treg在GITR表达出来里得到了扩展到和丰富，强调了大幅度研究者Treg在1改进型心血管疾病风险个微里的举例来说的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28