Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日益扩展

从第一次浮现家兔自身抗质到浮现1DF肾病临床研究症状的令人满意率在儿童时期就有很好的描绘，多个家兔自身抗质感染性的儿童中会有70%在血清转换后10年末患上肾病，而随访15年的儿童这一%增大到84%。远比，占临床研究1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的发作机制还没有得到合理的研究工作。

越来越多的人开始应用于有系统系统来定义1DF肾病的令人满意：个质在浮现多种家兔自身抗质时转入第1阶段，浮现体温精神状态时转入第2阶段，浮现症状时转入第3阶段。一些多发家兔自身抗质感染性的个质，在1期和2期，令人满意较快，并发展为发作的1DF肾病。我们之后描绘了一第举例来说在首次测定到多种家兔自身抗质样本后至亦然多10年无肾病的亦然快令人满意者，这第举例来说病征人数亦然多，但特点非常明确。随后，我们注意到家兔自身肝细胞特异性CD8+T蛋白反应在令人满意缓快的病征中会整体不不存在，但在近期发作和长期不存在的肾病病征中会很容易测定到。这显然表明，与令人满意病征相对，这些病征致病反应的调节强化。

早期研究工作表明，尽管调节性T蛋白(Treg)数目正常，但肾病病征不存在一些功能缺陷，其中会还包括对IL-2的反应技能降低。此外，肾病病征中会的效应CD4+T蛋白显然对调节突显抵抗性，体现为效应T蛋白的依赖性减弱，自然环境造成了的Treg和质外造成了的抑止Treg，以及肝细胞漫长的CD4+T蛋白中会IL-2反应减弱。本研究工作的目的是描绘了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群亦然缓快令人满意者中会的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

工具：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病征亲戚中会定期检查1DF肾病的危险诱因。我们之后描绘了长期缓快令人满意者的特点，他们始终保持多重家兔自身抗质感染性有约10年，但没有浮现肾病的临床研究症状，快性或非来性虐待致病。随后，10名继续始终保持无肾病并乐意备有大量体液样本的缓快令人满意者确立T和B蛋白功能系统性。在目前的研究工作中会，8名快令人满意者(SP第举例来说)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的家兔自身抗质感染性。所有的大多数人都处于1DF肾病令人满意的1期，尽管一些人随后保住了家兔自身抗质对某些肝细胞的感染性反应，然而，一名病征不太显然处于2期至亦然多6年，但没有浮现临床研究症状，一名病征被诊断为肾病，该测试者72岁，在采集检验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中会对该供质来进行了另行评核。分立外周血单个核蛋白(PBMCs)，运用于多参数流式蛋白绝技和T蛋白依赖性试验评核供质中会Treg的频率、表DF和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)来进行无统筹聚类系统性，评核Treg表DF。

结果：与健康供质相对，来自快令人满意质的无意识CD4+T蛋白的统筹聚类推测，作用于的无意识CD4+ Treg频率增大，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)强调增大有关。一名HbA1c上升的病征与令人满意缓快者和也就是说的对照第举例来说相对，Treg谱有所相异。功能系统性表明，与健康供质相对，来自缓快令人满意质的Treg介导的CD4+效应T蛋白依赖性轻微受损。体现为对效应CD4+T蛋白CD25和CD134强调的依赖性增大。

平面图1 深入的表DF系统性推测，CD4+Treg亚DF在快令人满意函数调用中会增大。由FlowSOM填充的Treg室，挤满在来自所有供质的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物强调鉴别出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个相异Treg标上填充的10个元簇的MST。每个路由亦然一个战斗群(100个战斗群)，较小的元战斗群(10个元战斗群)在路由第举例来说周围上色。每个路由中会的碗平面图回应单个标上的强调级别。(b)每个元聚类的热平面图，以推测整质标上强调。(c, d)为HD第举例来说(c)和SP第举例来说(d)填充平面图，以及FlowSOM标识的每个元簇的沙质。(e-l)相对于同位素为每个metacluster盒支线平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第举例来说:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。橘色圆圈亦然人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模DF推测，Treg频率的增大是令人满意缓快的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP大多数人和也就是说的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调来进行分立，模拟FlowSOM群质。(b) HD(小点)和SP(蓝点)第举例来说以及供质SP 606(橘色)中会CD25+ cd127的频率统计平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的盒支线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度上色，箭头突出的簇被标识为SP和HD函数调用二者之间的相异。(j)盒支线平面图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)第举例来说中会，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于同位素(%)。(k)直方平面图推测每个簇的表DF(紫色)和Treg标上相对于强调与背景强调(黄色);上列，缓存Treg_3;下面正要，缓存Treg_4。背景与所有其他簇中会标上的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与健康献血者相对，令人满意缓快者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个强调标上的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的强调热平面图(sp606不还包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR强调串联，推测直方平面图(c)和统计平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有供质还包括，p< 0.05(黄色)供质SP 606和也就是说的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR强调，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)串联，推测直方平面图(e)和统计平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自缓快令人满意的CD4+ treg蛋白依靠效应CD4+T蛋白的技能降低。SP第举例来说用黄色的支线和圆圈回应，HD第举例来说用紫色的支线和圆圈回应，橘色的支线/圆圈回应供质sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标上为CFSE, Treg按判读的%试样。用抗CD3 /28微珠再造蛋白，培训3天后来进行流式蛋白绝技测定。(a-d)与CD4+此番者相对于应的treg培训(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性多于。应用于感染性对照(作用于的响应蛋白不含treg)推算依赖性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 效应CD4+T蛋白对缓快令人满意的T蛋白再造的依赖性更是敏感。SP第举例来说用黄色的支线和圆圈回应，HD第举例来说用紫色的支线和圆圈回应，橘色的支线/圆圈回应供质sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标上，treg按判读的%试样。用抗CD3 /28微珠再造蛋白，培训3天后来进行流式蛋白绝技(CD25反染)和蛋白因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性%-(b)。(c,d) CD25依赖性%-(c)和CD134依赖性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自缓快令人满意子的再造无意识CD4+Treg在GITR强调中会得到了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1DF肾病后果个质中会的系统性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28